Eksperiment til dyrkning af dyrvirus i embryoneret kyllingeg (med figur)

Eksperiment til dyrkning af dyrvirus i embryoneret kyllingæg!

Princip:

Virus kan kun vokse i levende systemer. De kan ikke vokse i ikke-levende medier som næringsstof agar eller næringsstof bouillon. Derfor kræver deres dyrkning værtsceller modtagelige for den specifikke virus.

Viruset som bakteriofag, som inficerer og vokser i bakterieceller dyrkes ved hjælp af kulturer af bakterieceller som levende system.

For eksempel dyrkes virus-coliphagen (en bakteriofag) under anvendelse af bakterien E. coli-bakterien. I modsætning hertil kræver animalske vira, der inficerer og vokser i dyrene af dyr, modtagelige levende dyresystemer.

De tre levende dyresystemer, der anvendes til dyrkning af animalske vira i laboratorierne, er som følger:

1. Modtagelige dyr:

I denne teknik får den virus, der dyrkes, lov til at vokse i et levende dyrs krop, såsom mus eller marsvin, som er modtagelig for denne virus. Denne teknik anvendes ikke længere efter at være blevet erstattet af følgende nyere, effektive og økonomiske teknikker.

2. Vævskultur:

Det er en meget sofistikeret teknik. Her er animalske celler, der vides at være modtagelige for viruset, der skal dyrkes og også kendt for at formere sig hurtigt, først isoleret fra et levende dyrs levende væv. Disse celler anbringes i en glas- eller plastbeholder indeholdende et ekstremt rigt næringsmedium. Cellerne føjes til beholderens overflade og fortsætter med at dividere, indtil hele overfladen er dækket af et sammenflydende monolag af celler. Dette kaldes vævskultur.

Derefter inokuleres viruset, som skal dyrkes, i den modtagelige vævskultur. Virus inficerer vævskulturens levende celler, undergraver deres metaboliske maskiner og replikerer hurtigt og derved vokser meget i cellerne.

3. Embryonerede kyllingæg:

I denne enkle og økonomiske teknik injiceres viruset til et embryoneret kyllingæg. Virussen vokser i levende kyllingæg og forårsager sygdom i embryoet, manifesteret af adskillige sygdomssymptomer (cytopatogene virkninger), der er specifikke for den pågældende virus. Tilstedeværelsen af ​​disse symptomer indikerer væksten af ​​denne virus i ægget.

Materialer krævet:

To embryonerede kyllingæg, stearinlysapparat, tincturejod, absorberende bomuld, 70% alkohol, en lille øvelse, 1: 2 fortynding af Newcastle-virus, sprøjte, steril vasper, steril saltvand, petriskål, bunsenbrænder, laminært strømningskammer, kassér krukke, inkubator.

Procedure:

1. To embryonerede kyllingegaver lyses ved hjælp af en lysende enhed for at demonstrere fostrets levedygtighed. Embryoet er levedygtigt, hvis det viser bevægelse som reaktion på varme fra lys. Ligeledes bestemmes luftsækken og de store blodkarpositioner og markeres på æggeskallen under lysning (figur 8.7).

2. Skallen desinficeres over luftsækken med tinkturjod og lades derefter tørre. Det samme sted er swabbed med absorberende bomuld gennemblødt med 70% alkohol.

3. Spidsen af ​​en lille øvelse er steriliseret ved dypning i 70% alkohol og derefter flammende.

4. Ved hjælp af denne boring laves et lille hul aseptisk på skallen over luftsækken i et område væk fra blodkarrene.

5. 0, 2 ml af 1: 2 fortyndingen af ​​Newcastle-virus injiceres aseptisk i allantoisk hulrum i et af de to æg ved anvendelse af en steriliseret sprøjte. Dette gøres ved at holde ægget lodret og indsprøjte sprøjtens nål gennem hullet på skallen til hælen i en 45 ° vinkel, gennembore luftluftsmembranen og trænge ind i allantohulen. Dette virus-podede æg tjener som 'test æg'.

6. Efter podning er nålen trukket tilbage, og hullet på skallen forsegles med steril, varm vasper.

7. På samme måde injiceres 0, 2 ml steril saltvand i det andet embryonerede kyllingæg, der tjener som 'kontrol æg'.

8. Begge æggene inkuberes ved 37 ° C i 3 til 4 dage i en inkubator med en passende fugtighed.

9. Observationerne bemærkes hver dag.

10. Når døden er blevet bestemt, fjernes embryoen fra dens skal, og indholdet hældes i en petriskål og ses igen.

11. Alle forurenede materialer kasseres i et bæger, der indeholder blegepulver.

Observationer:

1. Ægene lyser hver dag under inkubation og observeres til embryonal død som det fremgår af ophør af bevægelse, som normalt opstår 3 til 4 dage efter inokulation af virus.

2. Når døden er blevet bestemt, fjernes embryoen fra dens skal, og indholdet hældes i en petriskål. Det observeres for nekrotiske læsioner og tegn på blødning.

3. Kontrolæget undersøges for evidens for cytopatogene virkninger.

4. Observationerne er optaget i tabel 8.2.