2 Metoder til elektroimmunodiffusionsteknikker til antigen og antistof
I immunodiffusionsteknikker får antigenet og antistoffet diffunderes til dannelse af en udfældningslinie, og dette tager længere tid (24-72 timer).
Hvis bevægelsen af antigen og / eller antistof gøres hurtigere, vil udfældningslinjen danne sig på meget kort tid, så diagnosen kan laves hurtigt. Dette mål opnås ved elektrisk bevægelse af antigenet og antistoffet. Der er mange variationer af dette princip. De to fælles metoder, der anvendes, er modstrøms immunoelektroforese og Laurells raketelektroforese.
Modstrømsimmunoelektroforese (Édimensionel dobbeltelektroimmunodiffusion):
To brønde skæres i agar på et objektglas.
↓
En brønd er fyldt med antigen, og den anden brønd er fyldt med antistof.
↓
Antarksidens side af agar er forbundet til anoden, og antigensiden er forbundet med elektroforeseapparatets katode.
↓
Ved anvendelse af elektricitet bevæger antigen- og antistofmolekylerne (på grund af deres elektriske ladninger) i agar under den elektriske påvirkning.
I en alkalisk buffer er de fleste af de klinisk vigtige antigener elektronegative og derfor bevæger de sig mod anoden (dvs. mod antistofbrønden). Antistofmolekylerne er elektrisk neutrale eller svagt negative. Normalt bør de elektrisk negative antistofmolekyler bevæge sig mod anoden.
Men bevægelsen af hydronumionerne i agar under elektroforese er meget stærk og trækker de svage negative antistofmolekyler mod katoden (dvs. mod antigenbrønden). Da antigen og antistofmolekyler bevæger sig i modsatte retninger, møder de hinanden og danner en bundlinie mellem de to brønde. Præciplinjen er synlig i 30 minutter (i modsætning til 24 timer i diffusion) og er ca. 10 gange mere følsom end diffusion.
Modstrømsimmunoelektroforese anvendes til at detektere
en. Meningokokale, kryptokokale og hæmofile antigener i cerebrospinalvæsken og
b. Hepatitis B overfladeantigen i serumet.
Lauren's Rocket Electrophoresis (One-Dimensional Single Electroimmunodiffusion):
Denne teknik bruges til at kvantificere antigener. Antistoffet blandes med smeltet agar og hældes på glasskinne. Efter størkning skæres brønde og fyldes med forskellige koncentrationer af antigen.
↓
Når der påføres el, føres antigenet ind i agarholdige antistoffer. Præciplinelinier dannes langs sidemarginalerne af den bevægelige grænse for antigen. Efterhånden taber antigenet ved udfældning, således at koncentrationen ved forkanten formindskes, og sidemarginalerne konvergerer til at danne et skarpt punkt. Således ligner det resulterende mønster af udfældning en spids eller raket.
Afstanden af spidsen fra antigenbrønden øges med stigning i antigenkoncentration. En standardkurve kan etableres ved anvendelse af kendte koncentrationer af antigener. Koncentrationen af et testantigen kan bestemmes ved interpolation af standardkurven med afstanden af den dannede raket.
Denne tekniks følsomhed er ca. 0, 5 mg / ml. Laurell teknik bruges også til at detektere antigener af kryptococcus, meningokocker og hæmofilus i cerebrospinalvæske (CSF).
