2 Type elektroforesemetoder af serumproteiner (med figur)

Serumet har et antal proteiner. I 1937 introducerede Arne W Tiselius metoden til adskillelse af de forskellige proteiner i et elektrisk felt.

Ved elektroforese separeres proteinerne i et elektrisk felt. Senere blev zonelektroforese i papir eller celluloseacetat udviklet. I 1952 blev der udviklet en to-trins metode, der kombinerede elektroforese med immunodiffusion. Bagefter introducerede C Williams, P Graber og M Poulik den klassiske metode til immunoelektroforese (hvor både elektroforese og dobbelt immunodiffusion udføres på det samme agarbelagte dias).

1. Zonelektroforese:

Proteiner kan adskilles på basis af deres overflade elektriske ladninger. Et inert bæremedium som papir, celluloseacetat eller agar anvendes til adskillelsen. Serumprøven anbringes på understøtningsmediet. Understøtningsmediet forbindes så til elektroforeseapparatets positive og negative poler. Under det elektriske felt bliver proteinerne opladet og bevæger sig over støttemidlet. Deres bevægelse afhænger af deres elektriske ladning.

Da forskellige proteinmolekyler har forskellige ladninger, bevæger de sig til forskellige positioner i understøttende medium. Normalt udføres elektroforese i 60-120 minutter eller mere. Derefter farves proteinerne og undersøges visuelt eller scannes i et densitometer. Densitometer scanning af de separerede og farvede proteinfraktioner omdanner hvert bånd til mønster i dets karakteristiske top og hjælper med kvantificering af hver proteinfraktion.

2. Serumproteinelektroforese:

Normalt humant serum er adskilt i fem store elektroforetiske bånd: albumin, α ₁ -globulin, α ₂ -globulin, β-globulin og y-globulin (figur 27.5).

Zonelektroforese er nyttig ved diagnosticering af visse humane sygdomme:

Fig. 27.5A til C:

Elektroforese på celluloseacetatstrimmel og densitometer scanning af celluloseacetatpapirstrimmel: A og A1: Normale serumproteinbånd på cellulær acetatstrimmel visualiseret efter farvning (A) og densitometer scanning fra celluloseacetatstrimmel (A1).

B og B1: Hypergammaglobulinæmi

C og C1: hypogammaglobulinæmi

jeg. Multipel myelom og Waldenstroms makro-globulinæmi. I disse sygdomme forekommer en elektroforetisk begrænset proteinpig sædvanligvis i y-globulinområdet. Spiken repræsenterer en akkumulering af et monoklonalt immunoglobulin. De monoklonale immunoglobuliner har en defineret overfladeladning, og der dannes derfor en spids (hvorimod det normale mønster af polyklonale immunoglobuliner frembringer et smear i y-globulinområdet).

ii. Hypogammaglobulinæmi (markant fald i serum gamma globulin).

iii. Hypoproteinæmi (markeret reduktion i alle serumproteiner).

iv. hypoalbuminæmi:

Reduktion af albumin, som forekommer i mange sygdomme i lever og nyre.

v. Elektroforese af urin hjælper til påvisning af frie immunglobulin-lette kæder, såsom Bence-Jones-protein.

vi. Zonelektroforese af cerebrospinalvæske (CSF) hjælper med diagnosticering af multipel sklerose og andre centralnervesystemforstyrrelser. Serumproteinelektroforese betragtes som et screeningsassay for påvisning af proteinabnormiteter. Yderligere analyse er nødvendig for at finde de specifikke abnormiteter.