Immunohistokemiske analyseteknikker til påvisning af tumormigener
Immunohistokemiske analyser anvendes i vid udstrækning til at detektere tumorantigener og at klassificere lymfocytcelletyper i kirurgiske patologisektioner.
Vævsprøven er fastgjort på en glasskinne.
↓
Enzymmærket mAb (konjugat) lagres over prøven og inkuberes.
jeg. Hvis prøven har specifikt antigen mod mAb'et binder konjugatet til antigenet på prøven.
↓
Efter vask tilsættes substrat og inkuberes.
jeg. Udvikling af farve angiver, at specifikt antigen mod mAb er til stede i vævssektionen.
ii. I fravær af specifik antigen er der ingen farveudvikling.
↓
Glideren er vasket og vævssektionen ses under mikroskopet for tilstedeværelse af farve.
Peberrodperoxidase (HRP) er enzymet, der almindeligvis anvendes i de immunhistokemiske teknikker. Substratet til HRP er hydrogenperoxid og diamino-benzidin. Reaktionen af HRP med diaminobenzidin frembringer en sort farve.
Peroxidase-antiperoxidase (PAP) er en anden metode, der anvendes i kirurgisk patologi til påvisning af enzymer og tumorrelaterede antigener.
Det er en tre-trins metode:
Trin 1:
Det væv, der mistænkes for at have et bestemt antigen, er fastgjort til en glasskinne.
↓
Kendt kaninantistof mod det pågældende antigen bliver droppet på vævet (mistænkt for at have antigenet) fastgjort til en glasskinne.
jeg. Hvis det tilsvarende antigen forekommer at være i vævet, binder antistoffet sig til det. Glideren vaskes efter inkubation.
↓
Trin 2:
Anti-kanin-immunoglobulin (kaldet link-antistof) tappes på diaset.
jeg. Hvis det første kaninantistof forekommer at være i diaset (bundet til antigenet) binder anti-kaninimmunoglobulinet til kaninantikroppen. Efter inkubering skylles glideren.
↓
Trin 3:
En immunkompleks, der består af kaninantistoffer mod peroxidase, kombineret med peroxidase, falder. Dette kaninantistof vil binde til anti-kanin-immunoglobinet (link-antistof-trin 2) gennem dets Fc-region. Efter inkubering skylles glideren.
↓
Endelig tilsættes peroxidasesubstrat. Substratet vil reagere med peroxidase, hvilket resulterer i dannelsen af et farvet produkt, der ses under mikroskop.
jeg. Tilstedeværelsen af det farvede produkt på vævet indikerer tilstedeværelsen af det tilsvarende antigen.
ii. Fravær af det farvede produkt på diaset angiver, at det pågældende antigen er fraværende i vævet.
