Klinisk relevans af Coombs test (antiglobulintest)
Coombs test er en simpel og genial teknik. Coombs 'test blev først beskrevet i 1908 af Moreschi og blev senere genopdaget af RR Coombs og kollegaer i 1945 for at demonstrere ikke-agglutinerende antistoffer mod de røde blodlegemer.
(Antistofferne kaldes "ikke-agglutinerende" antistoffer, fordi antistofferne ikke kunne forårsage agglutination, på trods af deres binding med antigenerne på RBC'er. Antistofferne omtales også undertiden som "ufuldstændige antistoffer", da antistofferne ikke forårsager agglutination. Men der er ingen ufuldstændighed i strukturen af antistofmolekyl.)
De ikke-agglutinerende antistoffer binder faktisk til antigenerne på overfladen af RBC'er. Men den forventede agglutination af RBC'er forekommer ikke. Når der tilsættes et andet antistof (kaldet anti-antistof eller antiglobulin) mod det RBC-bundne antistof, forekommer agglutinering. Antistofferne binder til Fc-regionerne af RBC-bundne antistoffer og danner et gitter, hvilket fører til agglutinationen. Testen hedder antiglobulintest eller Coombs 'test.
Der er to typer anti-globulin test:
1. Direkte anti-globulintest (DAT)
2. Indirekte anti-globulintest (lAT)
1. Direkte anti-globulintest (DAT) anvendes til at detektere antistof, som er bundet til RBC'er in vivo.
Vaskede RBC'er fra en patient blandes med anti-globulin.
↓
Anti-globulinerne binder til ikke-agglutinerende antistoffer på overfladen af RBC'er og forårsager synlig agglutination. Testresultatet er DAT positivt (figur 16.6).
Derfor foreslår en positiv DAT at patientens RBC'er er overtrukket med ikke-agglutinerende antistoffer, og patienten siges at være DAT-positiv.
jeg. Positiv DAT forekommer hos RBC af nyfødte med hæmolytisk sygdom hos nyfødte (RBC'erne af HDN er overtrukket med anti-Rh-antistoffer).
ii. I øjeblikket anvendes DAT til at detektere IgG-antistoffer og C3b bundet til overfladen af RBC'er. Hos patienter, der præsenterer med hæmolyse, er DAT-testen nyttig til at bestemme, om hæmolysen er af immunetiologi eller ej.
Fig. 16.6: Coombs direkte agglutinationstest (DAT).
DAT er brugt til at detektere tilstedeværelsen af ikke-agglutinerende antistoffer bundet på overfladen af RBC'er. A. Individets vaskede RBC'er blandes med anti-globulinreagenset. Anti-globulinerne binder til Fc-regionerne af de RBC bundne antistoffer og forårsager synlig agglutination, og individet siges at være DAT-positive. B. Hvis RBC'erne ikke er overtrukket med antistoffer, vil der ikke være agglutination, og individet siges at være DAT-negativt. DAT bruges også til at detektere tilstedeværelsen af anti-Rh antistofbelagte RBC'er af nyfødte, der mistænkes for at lide af hæmolytisk sygdom hos den nyfødte
jeg. Ikke-immune årsager til hæmolyse [såsom dissemineret intravaskulær koagulering, røde celleenzym mangler [såsom glukose-6-phosphat dehydrogenase mangel (G6PD-mangel), røde cellemembrundefekter (såsom arvelig sfærocytose, PNH) og hæmoglobinopatier seglcelleanæmi, thalassæmi)] er DAT negativ.
ii. Immunforårsager til hæmolyse (såsom autoimmun hæmolytisk anæmi, lægemiddelinduceret hæmolyse, hæmolytiske transfusionsreaktioner) er DAT-positive.
iii. En positiv DAT som følge af C3 alene ses hos patienter med kolde autoantistoffer, paroxysmalt kold hæmoglobinurstof og i nogle tilfælde af lægemiddelinduceret hæmolytisk anæmi.
2. Indirekte agglutinationstest (IAT) bruges til at detektere tilstedeværelsen af ubundne antistoffer mod RBC i patientens serum.
jeg. IAT til at detektere anti-Rh-antistoffer i mors serum:
Moderens serum inkuberes med Rh-positive O-blodgruppe RBC'er. Hvis anti-Rh antistoffer er til stede i moderens serum, binder antistofferne sig til RBC'erne. RBC'erne vaskes derefter.
↓
Derefter tilsættes anti-globulinreagenset.
↓
Hvis anti-Rh-antistoffer er til stede i moderens serum, vil RBC'erne være agglutinerede, og testen er positiv for IAT.
ii. IAT til at detektere antistoffer i en recipients serum mod donor-RBC'erne under blodtransfusion:
IAT-test er almindeligt anvendt (før blodtransfusion) i krydsafstemningen af donorens RBC'er med modtagerens serum for at detektere tilstedeværelsen af antistoffer i modtageren, hvilket kan reagere med donorens RBC'er.
Vask donorens RBC'er.
↓
Tilsæt modtagerens serum til RBC'erne og inkuber ved 37 ° C i 30 minutter.
↓
Vask RBC'erne.
↓
Tilsæt anti-globulin reagenset.
Udvikling af agglutination indikerer, at modtagerens serum har antistoffer mod donor-RBC'erne, og testen er rapporteret som positiv for antistoffer. Et positivt IAT-resultat indikerer, at det foreslåede donorblod ikke skal transficeres til den pågældende modtager.
Nuværende anti-globulin testreagens (også kaldet Coombs 'reagens) præparater indeholder en' cocktail 'af monoklonale antistoffer rettet mod humant IgG og C3b (Binding af ikke-agglutinerende antistoffer mod RBC'er aktiverer komplementsystemet, der resulterer i aflejring af C3b-fragmenter over RBC'er, og derfor bortset fra antistoffer, er RBC'erne overtrukket med C3b-fragmenter også).
