Fluorescerende i situ-hybridisering (FISH)
I denne artikel vil vi diskutere om fluorescerende in situ hybridisering (FISH).
Det er en laboratorieteknik, der bruges til at bestemme, hvor mange kopier af det specifikke segment af DNA der er til stede i en celle. Det identificerer specifikke kromosomale regioner i cytologiske præparater. I laboratoriet modificeres et segment af DNA kemisk modificeret eller farves med fluorescerende farvestof, og når det undersøges under fluorescerende mikroskop, ser det meget lysende fluorescerende ud.
Fluorescens in situ hybridisering har i høj grad forøget følsomheden, specificiteten og opløsningen af kromosomanalyse.
Fordelene ved denne teknik er talrige, men nogle nævnes som følger:
(1) Opløsningen af denne metode er meget bedre end den traditionelle kromosombånding og ca. 2 megabaser (Mb) i længden.
(2) Protokollen i denne teknik er let og kan anvendes til både opdeling af celler såvel som ikke-delende celler. Denne teknik kan identificere en række mutationer, herunder deletion, duplikering, aneuploidi og tilstedeværelse af derivatkromosomer. Denne teknik anvendes også almindeligt til at overvåge tilbagevendende eller resterende sygdom hos knoglemarvstransplantationspatienter.
FISH (fluorescerende in situ-hybridisering) udføres generelt på stimuleret perifert blod til både kromosomanalyse og identifikation af specifik translokation og deletion. For eksempel er det brugt til at demonstrere Philadelphia-kromosom (Ph 1 ) dannet ved translokationen mellem kromosom 9 og 22 og forårsager kronisk myelogen leukæmi (CML).
Det bruges også til identifikation af translokationen mellem kromosom 8 og 14, der forårsager Burkitts lymfom og mellem kromosom 18 og 14, der resulterer i B-celle leukæmi. Det bruges også til diagnosen Down Syndrome.
I FISH-proceduren kan cellekulturer fremstilles. Metafasen / prometaphase kromosomerne er fastgjort på en glasskinne. Derudover kan FISH modificeres til analyse af interfasekerner. Derefter denektoreres kromosomerne; en mærket DNA-probe introduceres derefter, og sonden hybridiseres derefter til kromosomet på objektglasset. Derfor er udtrykket 'in situ'-hybridisering givet.
DNA-proberne er mærket med fluorochrom, en sådan probe giver fluorescerende signal og kunne ses med fluorescensmikroskopi. Fluorescensen kunne fratrækkes ved hjælp af filtre fastgjort i fluorescerende mikroskop.
FISH-prober er ca. 40 kilo baser (kb) i længden og detekteres som et dobbelt fluorescerende signal på hvert medlem af et kromosompar. Den dobbelte prikk svarer til signalerne fra hver af de to justerede søsterkromatider.
I sin simple applikation ville et normalt FISH-mønster for en sådan sonde være to sæt dobbeltpunkter, et sæt for hvert medlem af de normalt parrede kromosomer. Disse dobbelt prikker smelter ofte til at danne et signal. Celler monosomiske for den pågældende kromosomale region ville kun vise et enkelt sæt dobbeltdot pr. Kerne, mens trisomceller ville vise tre sæt dobbeltpunkter.
